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SILAC实验|实验技术服务

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SILAC实验|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
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测序实验流程：
SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC)，其基本原理是分别采用含有轻、中或重型同位素必需氨基酸的培养基培养细胞（用于SILAC的稳定同位素氨基酸主要有Lys和Arg），新合成的蛋白质即嵌合了同位素氨基酸，如此培养5-6代后，细胞的所有蛋白质均被同位素标记上。经处理因素刺激后，等量混合各类型蛋白质，然后经SDS-PAGE分离和质谱分析，通过比较**质谱图中同位素峰型的面积大小进行相对定量，同时二级谱图对肽段进行序列测定从而鉴定蛋白质。
由于SILAC标记技术是体内标记技术，几乎不影响细胞的功能，同时灵敏度高，因此其在蛋白质组学相关领域中得到了广泛的应用，如比较蛋白质组学，蛋白质与蛋白质相互作用，蛋白质与DNA相互作用，蛋白质与RNA相互作用等领域。
与体外标记技术相比，SILAC属于体内标记，具有以下技术优势
1、高通量，可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质；
2、定量**，降低由于样品制备不同而造成的实验差异；
3、线性定量范围广；
4、灵敏度更高，蛋白质需要量明显减少；
5、标记采用的是体内标记技术，更接近样品真实状态。
SILAC技术服务内容
1、细胞同位素标记；
3、SDS-PAGE分离；
4、胰酶酶切后液相分离和质谱分析；
5、数据库检索及蛋白质定量分析；
6、差异蛋白的生物信息学分析
7、实验报告提交。
实验服务报告内容
1、蛋白定鉴定和SILAC定量分析结果；
2 、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图；
3、SILAC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。

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