原核表达服务
实验步骤及周期
一、 目的基因全基因合成：
1.从基因库中搜索目的蛋白的cDNA序列（或客户提供序列）；
2.根据选用的表达系统对cDNA进行密码子、mRNA二级结构等的优化；
3.合成设计好的基因序列。
交付标准：目的基因及测序报告。
时间：2-3周
二、目的基因的亚克隆：
1.扩增并抽提含有目的基因的载体质粒；
2.将目的基因亚克隆到合适的表达质粒上；
3.测序验证构建质粒的准确性；
4.可提供表达载体（PET系列为主）
交付标准：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的菌株及测序报告。
时间：1-2周
三、E. coli 表达菌株转化及筛选：
1.扩增并抽提构建好的表达质粒；
2.将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。
3.至少挑选10个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件，SDS-PAGE 检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株；
4.可提供表达菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue等。
交付标准：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
时间：1周
四、目的蛋白表达及纯化：
1.对诱导表达的时间，温度以及IPTG浓度等进行优化，摸索*佳条件。
2.摇瓶培养1L重组细菌，通过亲和、离子交换、疏水及凝胶过滤等层析方法纯化目的蛋白。
3.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制*终产品质量。
交付标准：纯化好的目的蛋白1~5mg及纯化报告，纯度*高可达85-90%以上。
时间：2周
五、目的蛋白的再加工及详细检测：
1.对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
2.内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。
3.通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量
交付标准：加工后的终产品及相关实验和检测报告。
时间：2-3周
六、大规模制备：
按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品。
交付标准：合格的目标蛋白及服务报告。
实验技术服务http://www.dlhsxd.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html原核表达服务
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